名称:Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum蛋白双向电泳, Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum蛋白质谱, Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum双向电泳和质谱分析
品牌:YELSAB 型号:Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum
产地:PRC 新旧:0
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简介:Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum蛋白质双向电泳技术
Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum蛋白质谱分析
Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum
two dimensional electrophoresis
Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum Protein Mass Spectrometry
Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum Protein identification and analysis
2-D双向电泳是目前为止最有效、使用最多的蛋白分离方法,是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段,已得到广泛应用。这项技术利用蛋白质的两种特性,分两步将不同的蛋白质分离。第一向步骤为等电聚焦(IEF),即根据蛋白质的等电点(pI)差异将蛋白质分离。第二向步骤为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),即利用蛋白质的分子量(Mr, 相对分子量)差异将蛋白质分离。双向凝胶电泳结果中的每个斑点都对应着样本中的一种蛋白。因此,可将上千种不同的蛋白质分离开来,并得到每种蛋白质的等电点、表观分子量和含量等信息。差异蛋白质组学是在双向电泳后用考马斯亮蓝、银离子或荧光染料等将蛋白斑点染色,然后比较差异。仪方生物在各类微生物、培养细胞、动植物组织(如动物软硬组织、体液、植物种子、叶子等)、亚细胞组分的双向电泳分离及后续质谱鉴定中均有丰富的经验。
服务项目和主要步骤:
- 根据客户需求定制蛋白质组学实验方案。
- 样品制备(蛋白提取):主要包括植物、动物细胞或组织等的破碎、离心以及定量。
- 第一向IEF等电聚焦实验。
- 第二向SDS-PAGE实验。
- 硝酸银染色或考马斯亮蓝染色。
- 图像分析及数据处理。
- 提供双向电泳的正式实验报告。
- 选取感兴趣的蛋白点进行酶解。
- 对酶解后蛋白进行质谱技术分析(Maldi-Tof-Tof/MS)。
- 提供质谱的正式实验报告。
结果报告:
- 实验的试剂耗材、仪器设备、操作过程一份;
- 实验结果凝胶扫描图片;
- 电泳凝胶(可收费干胶);
- 剩余样本。
样品要求:
- 建议客户提供的原样(组织、细胞、菌体等)湿重不少于100mg,如直接提供蛋白提取物,则浓度不少于4ug/ul,总量不少于5mg。
- 样品需为可溶的固体蛋白或液体蛋白溶液,建议液体蛋白溶解体系为6M尿素,2M硫脲,/4%CHAPS/40mM Tris/65mM DTT。如溶解于其它缓冲液体系中,请应提供缓冲液成分。
- 单次硝酸银染色提供蛋白量不小于0.6mg;单次考马斯亮蓝染色提供蛋白量不小于2mg;总蛋白量不小于2mg。
- 用于一次制备型样品,动物组织或菌体的新鲜样本始终不小于1g;收集细胞数量不小于2×108;植物或真菌样品湿重不小于5g;
- 为避免蛋白样品降解,客户所寄的蛋白样本最好为冻干品,若为溶液蛋白,则需低温保存,血液血浆样品应贮于4℃保存,其它液体蛋白溶液贮于-20℃保存。
- 如样品中含有杂质例如核酸、脂类、多糖、色素类等或需其它特殊要求例如浓缩、透析等请提前告知,价格将视进一步处理的难度和耗材用量另行商定。